Автор:

Али Найманов

Рубрика:

Актуальные проблемы туберкулеза и паратуберкулеза животных

А. Х.Найманов, Н.Г.Толстенко, В.С.Суворов, О.В.Якушева, ВИЭВ, г. Москва, Россия

На современном этапе борьбы с туберкулезом животных основой профилактических и оздоровительных мероприятий является диагностика болезни. Основным методом прижизненной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота была и остается внутрикожная туберкулиновая проба с ППД-туберкулином для млекопитающих.

Массовое применение внутрикожной туберкулиновой пробы в широкой ветеринарной практике создает две противоположные проблемы: с одной стороны – перевыявление, то есть выявление реагирующих здоровых животных с «неспецифическими», «парааллергическими» реакциями на туберкулин в благополучных и неблагополучных хозяйствах; с другой стороны – недовыявление зараженных туберкулезом (анергичных) животных в неблагополучных хозяйствах.

Анализ статистических данных показывает, что в Российской Федерации с 1988 года происходит постепенное ежегодное улучшение эпизоотической ситуации по туберкулезу крупного рогатого скота. Так, на 1 января 1987 года в РФ было официально зарегистрировано 1945 неблагополучных пунктов (н.п.), а на 1 января .2010 года остается 23 н.п..

Кроме того установлено, что с улучшением эпизоотической ситуации по туберкулезу крупного рогатого скота увеличивается и проблема

выявления неспецифических реакций на туберкулин. Так, в 2009 году выявлено всего реагирующих – 49032, из них в н.п. –  2085 (4,2%), а в благополучных стадах –  46947 (95,7%) , т.е. в 22,5 раза больше реагирующих животных. Поэтому, главной проблемой при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота в последние годы является массовое выявление и необходимость дифференциации неспецифических реакций на туберкулин.

Основной причиной выявления парааллергических реакций считается сенсибилизация крупного рогатого скота близкородственными нетуберкулезными (атипичными) микобактериями (НТМБ).

Атипичные микобактерии имеют общие с M.bovis антигенные детерминанты, которых достаточно для сенсибилизации и аллергенного ответа организма на туберкулин (Авербах М.М., 1976: Медуницын Н.В.,1983).

Поэтому эти микобактерии являются частой причиной выявления временной гиперчувствительности замедленного типа у КРС на туберкулин, а в отдельных случаях некоторые виды микобактерий вызывают туберкулезоподобные изменения, которые могут привести к диагностическим ошибкам.

Нетуберкулезные микобактерии ранее обозначались как анонимные, анормальные, неклассифицированные, оппортунистические и атипичные. Но наиболее удачное определение этой группы микобактерии было предложено E.H.Runyon (1974) и E.Wolinsky (1979) –  нетуберкулезные микобактерии. Термин «атипичные микобактерии» используется и в настоящее время. Однако бактериологические и молекулярно-генетические свойства этих микобактерии характеризуют их как типичных представителей рода Mycobacterium. Поэтому в настоящее время более справедливо пользоваться термином нетуберкулезные микобактерии (НТМБ).

На основании анализа нуклеиновых кислот, количественной таксономии и серологических методов исследований установлено, что НТМБ являются самостоятельными видами, а не мутантами микобактерии туберкулеза.

Известно, что частое выявление НТМБ в организме человека и животных обусловлено широким распространением их в окружающей внешней среде, а главным природным резервуаром таких микобактерий являются почва и вода.

Постоянные исследования окружающей внешней среды: воды, почвы, продуктов питания, продуктов жизнедеятельности человека и животных привели к выявлению значительного количества различных видов НТМБ.

Ощепков В.Г., Таллер Л.А., Овсянов И.И., Дюсенова Г.М. (2003) выделяли НТМБ от реагирующих и нереагирующих на туберкулин животных в благополучных по туберкулезу хозяйствах. Эти микобактерии без особых проблем выделяли из объектов внешней среды: соскобов с пола, навозных каналов, кормовых проходов и других мест животноводческих помещений.

Кроме того установлено, что НТМБ могут паразитировать во многих живых организмах разных биологических хозяев, включая человека, животных, рыб и птиц. Сообщения о роли насекомых как «вектора» в трансмиссии микобактерии все чаще стали появляться в современных публикациях.

Благодарный Я.А., Макаревич Н.М., Блехман И.М. (1971) выделили НТМБ от спонтанно инфицированных птичьих клещей Arguspersicus.

Раi Н.Н., Chen W.C., Peng C.F. (2003) выделили M.kansasii, M.xenopi, M.gordonae, M.hemofilium, M.fortuitum и M.avium от 12 особей тараканов в Южном Тайване.

Fischer О., Matlova L., Dvorska P. et al. (2001) при исследовании 314 образцов 7791 особей мух в 14 случаях (4,5%) выделили НТМБ и установили факт распространения мухами M.avium, M.intracellularae, M.fortuitum, M.scrofulaceum, М.рагаtuberculosis и M.phlei.

Fischer O., Matlova L, Dvorska P. et al. (2003) установили, что тараканы способны распространять M.avium и М.рагаtuberculosis.

Анализ доступной отечественной литературы показывает, что в ветеринарной практике нашей страны данных о выделении НТМБ от насекомых не имеется. Поэтому, учитывая сложившуюся эпизоотическую ситуацию по туберкулезу животных в России, увеличение проблемы выявления неспецифических реакций на туберкулин и недостаточную изученность некоторых вопросов прижизненной и лабораторной диагностики болезни, изучение возможных источников распространения и сенсибилизации крупного рогатого скота разными видами микобактерий является своевременным и актуальным.

Целью проведенных исследований является определение роли мух в распространении микобактерий, сенсибилизации КРС и проявлении неспецифических реакций на туберкулин.

 

Материалы и методы

 

Работа выполнена в лаборатории микобактериозов и сектора патоморфологии ВИЭВ, в Вышневолоцкм отделе ВИЭВ и в одном благополучном по туберкулезу хозяйстве, где при плановых аллергических исследованиях выявлялись реагирующие на туберкулин животные с неспецифическими реакциями.

Аллергические, патологоанатомические и лабораторные исследования проводили в соответствии с «Наставлениями по диагностике туберкулеза животных» от 2002 года.

Аллергические исследования крупного рогатого скота проводили методом симультанной туберкулиновой пробы с использованием ППД-туберкулина для млекопитающих и КАМ. Для диагностического убоя отбирали наиболее характерно реагирующих, с большим увеличением толщины кожной складки на ППД- туберкулин для млекопитающих коров.

На ферме, где выявляли массово реагирующих коров и одновременно обнаружено необычно множественное заселение мух, были отловлены мухи для бактериологического исследования.

В лаборатории исследовали 5 образцов из 100 отловленных мух.

Бактериологические исследования образцов мух проводили по модифицированной методике Аликаевой. Из образцов готовили суспензию на физиологическом растворе, через ватно-марлевый фильтр отбирали суспензию, центрифугировали 15 минут при 3000 o6oротах, трехкратно отмывали физиологическим раствором и проводили посевы на две среды: Левенштейна-Йенсена и Фаст-ЗЛ. Одновременно обрабатывали биоматериал от убитых коров по методу Аликаевой.

Идентификацию НТМБ, выделенных из образцов мух и патматериала от реагировавших на туберкулин убитых коров, проводили культурально-морфологическими и биохимическими методами исследований.

Культурально-морфологические свойства выделенных НТМБ изучали по скорости роста культуры, образованию пигмента, морфологии колоний, росту при разных температурных режимах.

Биохимические свойства НТМБ изучали по ферментативной активности микобактерий (амидазная активность, наличие каталазы, способность вызывать гидролиз Твин-80, восстанавливать нитраты, рост на среде с салициловым натрием).

 

Результаты исследований

 

В ПСК «Новомихайловское» Монастыршенского района Смоленской области на 1 января 2008 года имелось 3834 голов крупного рогатого скота, в том числе 1048 коров. Кроме того, в хозяйстве имелось 416 свиней. Смоленская область, в том числе Монастрыршенский район, благополучны по туберкулезу КРС.

В соответствии с представленными актами диагностических исследований, реагирующие на туберкулин животные стали выявляться в хозяйстве с 2006 года.

Так, в апреле указанного года при плановом обследовании поголовья на туберкулез внутрикожной туберкулиновой пробой было выявлено 9 реагирующих коров. Все реагирующие животные были сданы на убой. При патологоанатомическом осмотре убитых коров характерных для туберкулеза изменений не обнаружено. Лабораторные исследования патматериала от убитых животных не проводили.

В декабре 2006 года при очередных плановых аллергических исследованиях 1532 голов крупного рогатого скота реагирующих животных не выявлено.

В апреле 2007 года при аллергических исследованиях 1511 голов КРС выявлено 16 реагирующих коров. При диагностическом убое 8 реагирующих на туберкулин особей характерных для туберкулеза изменений не обнаружено ни в одном случае. Лабораторные исследования патматериала от убитых животных не проводили.

В декабре 2007 года при исследовании 2439 голов крупного рогатого скота внутрикожной туберкулиновой пробой выявлено 36 реагирующих коров. При диагностическом убое 10 реагировавших на туберкулин особей характерных для туберкулеза изменений не обнаружено ни в одном случае.

При лабораторном исследовании патматериала от 10 убитых коров возбудителя туберкулеза не выделили.

В связи со значительным и постоянным выявлением реагирующих животных, дальнейшие исследования поголовья крупного рогатого скота проводили комиссионно, совместно с сотрудниками лаборатории микобактериозов ВИЭВ, ветеринарными специалистами управления ветеринарии Смоленской области и Монастыршенского района.

Так, в апреле 2008 года были проведены комиссионные исследования 1550 голов крупного рогатого скота. Исследования проводили симультанной туберкулиновой пробой с использованием ППД-туберкулина для млекопитающих и КАМ.

На комплексе при исследовании 615 голов КРС выявлено реагирующих на туберкулин всего – 12, из них с большей реакцией на ППД для млекопитающих (знак +) – 7, с большей реакцией на КАМ (знак -) –5, с равной реакцией (знак=) – 0. Результат симультанной пробы неопределенный.

На ферме «Кислое» при исследовании 197 голов крупного рогатого скота выявлено 14 реагирующих, из них со знаком + 14, — 0, = 0. Результат симультанной пробы достоверно более выражен на ППД-туберкулин для млекопитающих.

На ферме «Вачково» при исследовании 128 голов крупного рогатого скота выявлено реагирующих – 3, из них со знаком + 3, — 0, = 0. Результат симультанной пробы неопределенный.

На ферме «Городец» при исследовании 101 головы КРС, выявлено реагирующих 2, из них со знаком + 2, — 0, = 0. Результат симультанной пробы неопределенный.

На фермах «Доманово» и «Перепечино» при исследовании 345 голов крупного рогатого скота реагирующих животных не выявлено.

По результатам симультанной пробы в хозяйстве всего выявлено 31 реагирующая на туберкулин корова. При анализе характера проявления аллергических реакций установлено, что наиболее характерные по степени проявления и интенсивности аллергические реакции выявлены среди поголовья крупного рогатого скота на первом комплексе и на ферме «Кислое». Наибольшее количество реагирующих животных было выявлено в «Кислом». Поэтому по результатам симультанной туберкулиновой пробы на ферме «Кислое» проведен выборочный диагностический убой одной наиболее характерно реагирующей коровы. Корова № 3619 реагировала на ППД для млекопитающих увеличением толщины кожной складки на 13 мм, на КАМ – 7 мм. При патологоанатомическом осмотре убитой коровы характерных для туберкулеза изменений не обнаружено. При лабораторном исследовании патматериала от убитого животного возбудитель туберкулеза не выделен.

Во время эпизоотологического обследования и проведения аллергических исследований поголовья крупного рогатого скота хозяйства было обращено внимание на обилие мух в животноводческих помещениях комплекса. Мухи буквально облепили коров, что было довольно необычно для этого времени года. Поэтому, учитывая нестандартную ситуацию в этом животноводческом комплексе, было решено отловить мух для проведения бактериологических исследований. При проведении беседы с обслуживающим персоналом фермы выяснено, что мухи размножались в невероятном количестве в теплом и сыром подвале животноводческого комплекса, а в помещения фермы мухи залетали из открытых весной люков.

В дальнейшем при проведении лабораторных исследований биоматериала из пяти образцов созданных проб были выделены культуры быстрорастущих атипичных микобактерий желтого цвета (культура №1) и беспигментная культура, выросшая на 14 день инкубации.

По результатам проведенных исследований специалистам хозяйства рекомендовано провести дезинфекцию, дезинсекцию и дератизацию помещений и подвалов комплекса.

В декабре 2008 года проведены очередные комиссионные исследования поголовья крупного рогатого скота хозяйства. Исследования проводили симультанной туберкулиновой пробой с использованием ППД для млекопитающих и КАМ. При учете результатов симультанной пробы всего в хозяйстве выявлено 53 реагирующих коров.

На комплексе при исследовании 628 голов КРС выявлено реагирующих – 32, из них со знаком + 20, — 8, = 4. Результат симультанной пробы достоверно более выражен на ППД-туберкулин для млекопитающих.

На ферме «Кислое» при исследовании 190 голов крупного рогатого скота выявлено реагирующих – 11, из них со знаком + 5, — 4, = 2. Результат симультанной пробы неопределенный.

На ферме «Вачково» при исследовании 140 голов КРС выявлено реагирующих – 4, из них со знаком + 2, — 1, = 1. Результат симультанной пробы неопределенный.

На ферме «Перепечино» при исследовании 162 голов крупного рогатого скота, выявлено реагирующих – 2, из них со знаком + 1, — 1, = 0. Результат симультанной пробы неопределенный.

На ферме «Колодино» при исследовании 169 голов КРС выявлено реагирующих – 4, из них со знаком + 2, — 0, = 2. Результат симультанной пробы неопределенный.

На фермах «Доманово» и «Городец» при исследовании 224 голов крупного рогатого скота реагирующих животных не выявлено.

Результаты проведенных исследований показали, что наибольшее количество реагирующих на туберкулин 32 (60,3%) коров было выявлено на комплексе, где было ранее обнаружено обилие мух.

По результатам симультанной пробы в данном комплексе проведен диагностический убой коровы № 3185. Корова №3185 реагировала на ППД-туберкулин для млекопитающих – 7 мм, на КАМ – 3 мм. При патологоанатомическом осмотре убитой коровы характерных для туберкулеза изменений не обнаружено. При лабораторном исследовании патматериала от убитой особи выделены культуры нетуберкулезных микобактерий III и IV группы по классификации Раньона (быстрорастущая культура желтого цвета №3 и беспигментная культура №4).

Для определения видовой принадлежности выделенных НТМБ были проведены биохимические исследования. Результаты исследований отображены в таблице №1. 

При проведении биохимических тестов культуры №2 и №4 отнесены к M.avium intracellulare complex. Рост культур отмечался при температуре 22-52^ОC, тест на термостабильную каталазу, никатинамидазу и пиразинамидазу положительный. Культурально-морфологические и биохимические исследования позволяют предполагать, что культура №2 и №4 относятся к M.intracellulare.

В целях подтверждения принадлежности культур №2 и №4 к М. intracellulare, провели дополнительно биопробу на двух морских свинках, двух кроликах и двух курицах.

Кур заражали культурами НТМБ №2 и №4 внутривенно в подкрыльцовую вену в дозе 1 мг культуры суспендированной в 1 мл физиологического раствора, кроликов – в той же дозе в краевую вену уха, морских свинок подкожно в область паха. После убоя и патологоанатомического исследования лабораторных животных характерных для туберкулеза изменений во внутренних органах не обнаружили.

Проведенные биологические исследования подтвердили принадлежность культур №2 и № 4 к M.intracellulare.

При проведении культурально-морфологических и биохимических тестов культуры №1 и №3 отнесены к быстрорастущим микобактериям IV группы по классификации Раньона M.phlei.

При очередных комиссионных исследованиях поголовья крупного рогатого скота хозяйства в апреле 2009 года выявлено 20 реагирующих на туберкулин коров.

 

Таблица №1.

 Биохимические свойства выделенных культур микобактерий

 

	Культура
	№1	№2	№3	№4
Скорость роста (дни)	3	14	3	10
Рост при 22ОС  37 ОС  42 ОС  52 ОС	+ + + +	— + + —	+ + + +	— + + —
Пигментообразование	c	н	с	н
Ацетамидаза	—	—	—	—
Уреаза	+	—	+	—
Никотинамидаза	+	+	+	+
Пиразинамидаза	+	+	+	+
Арилсульфатаза   трехдневная  четырнадцатидневная	+	— +	+	— +
Гидролиз Твин-80	+	—	+	—
Восстановление нитратов	+	—	+	—
Каталаза	+	+	+	+
Рост на среде с салициловым Na	+	+	+	—
Видовая принадлежность	M.phlei	M.intracellulare	M.phlei	M.intracellulare

 

На комплексе при исследовании 553 голов крупного рогатого скота выявлено реагирующих – 10, из них со знаком + 8, — 2, = 0. Результат симультанной пробы неопределенный.

На ферме «Кислое» при исследовании 206 голов КРС выявлено 2 реагирующих на туберкулин особи, из них со знаком + 2, — 0, = 0. Результат симультанной пробы неопределенный.

На ферме «Вачково» при исследовании 128 голов крупного рогатого скота выявлено 3 реагирующие коровы, из них со знаком + 2, — 0, = 1. Результат симультанной пробы неопределенный.

На ферме «Колодино» при исследовании 156 голов КРС выявлено реагирующих – 4, из них со знаком + 2, — 1, = 1. Результат симультанной пробы неопределенный.

На фермах «Доманово» и «Перепечино» при исследовании 351 головы крупного рогатого скота выявлена только одна реагирующая корова.

По результатам симультанной пробы в комплексе проведен диагностический убой коровы №4971, которая реагировала на ППД-туберкулин для млекопитающих – 8 мм, на КАМ – 0 мм. При патологоанатомическом осмотре убитой особи характерных для туберкулеза изменений не обнаружено. При лабораторном исследовании патматериала от убитой коровы возбудитель туберкулеза не выделен.

При заключительных исследованиях 1639 голов крупного рогатого скота в апреле 2010 года было выявлено 15 реагирующих коров.

На комплексе при исследовании 829 голов крупного рогатого скота выявлены только 2 реагирующие коровы, из них со знаком + 1, — 1, = 0. Результат симультанной пробы неопределенный.

На ферме «Кислое» при исследовании 189 голов КРС выявлены 2 реагирующие коровы, из них со знаком + 1, — 0, = 1. Результат симультанной пробы неопределенный.

На ферме «Вачково» при исследовании 126 голов крупного рогатого скота, выявлены 6 реагирующих коров, из них со знаком + 5, — 1, = 0. Результат симультанной пробы неопределенный.

На ферме «Колодино» при исследовании 166 голов КРС выявлены 4 реагирующие коровы, из них со знаком + 3, — 0, = 1. Результат симультанной пробы неопределенный.

На фермах «Доманово» и «Перепечино» при исследовании 329 голов крупного рогатого скота выявлена только одна реагирующая корова.

По результатам симультанной пробы (в связи с увеличением количества реагирующих животных на ферме «Вачково» и с уменьшением количества реагирующих особей на остальных фермах) проведен диагностический убой одной реагирующей коровы на ферме «Вачково». Корова №2373 реагировала на ППД для млекопитающих – 3 мм, на КАМ – 2 мм. Следует отметить, что корова №2373 реагировала повторно, так как в декабре 2009 года она реагировала на ППД для млекопитающих – 4 мм, на КАМ – 0 мм. При патологоанатомическом осмотре коровы характерных для туберкулеза изменений не обнаружено. При лабораторном исследовании патматериала от убитой особи возбудитель туберкулеза не выделен.

Таким образом, резюмируя результаты проведенных исследований, сделано заключение, что поголовье крупного рогатого скота ПСК «Новомихайловское» благополучно по туберкулезу. Причиной выявления неспецифических реакций среди поголовья КРС хозяйства является сенсибилизация животных НТМБ III (M.intracellulare) и IV (M.phlei) групп по классификации Раньона.

Выводы:

1.       Мухи могут служить «вектором» передачи и распространения

 НТМБ среди поголовья крупного рогатого скота.

2.        Выделение одних и тех же видов НТМБ из мух и патматериала от

убитых с диагностической целью peaгировавших на туберкулин коров из одного животноводческого помещения доказывает возможность сенсибилизации особей этими видами микобактерий.

3.        В благополучных по туберкулезу хозяйствах, где выявляются

реагирующие на туберкулин животные, после проведения механической уборки, дезинфекции и дезинсекции в животноводческих помещениях, значительно сокращается количество особей с неспецифическими реакциями.

 

Практические предложения

В целях предотвращения возможного распространения НТМБ и сенсибилизации крупного рогатого скота необходимо проводить механическую очистку, дезинфекцию, дератизацию и дезинсекцию животноводческих помещений.

   

Список использованной литературы

1.     Авербах М.М., Иммунология и иммунопатология туберкулеза // Медицина, 1976, 312 с.

2.     Благодарный Я.А., Макревич Н.М., Блехман И.М. Выделение

атипичных микобактерий от спонтанно инфицированных птичьих клещей Arguspersicus. «Пробл. Туб.», 1971,№6, с. 74-76.

3.     Медуницын Н.В. Повышенная чувствительность замедленного типа.

 М.: Медицина, 1983.

4.     «Наставление по диагностике туберкулеза животных» (утв.

Департаментом ветеринарии МСХ РФ), М., 2002, 63 с.

5.     Ощепков В.Г., Талер Л.А., Овсянова Н.И., Дюсенова Г.М. О значении симультанной аллергической пробы при диагностических исследованиях крупного рогатого скота на туберкулез \ Сб. науч. Трудов ВНИИБТЖ, 2003, с. 20-26.

6.      Fischer O., Matlova L., Dvorska P. et al. Diptera as vectors of

 mycobacterial infections in cattle and pigs \Med. Vet. Entomol., 2001, Jun;

15(2): 208-11

7.     Fischer O., Matlova L., Dvorska P. et al. Nymphs of the Oriental cockroach (Blatta orientalis) as passive vectors of causal agents of avian tuberculosis and paratuberculosis \ Med. Vet. Entomol., 2003, Jun; 17(2):

145-50/

8.     Pai H.H., Chen W.C., Peng C.F., Isolation of nontuberculous mycobacteria from hospital cockroaches ( Periplaneta Americana)\ J. Hosp. Infect., 2003, Mar.; 53 (3): 224-8.

• туберкулез
• КРС
• крупный рогатый скот
• диагностика
• микобактерии