Совершенствование симультанной туберкулиновой пробы для дифференциации неспецифических реакций у крупного рогатого скота
Али Найманов
А. Х. Найманов, д.в.н., профессор, заведующий лабораторией микобактериозов;
Г. И. Устинова, к.б.н., заведующая лабораторией биохимии;
Н. Г. Толстенко, к.в.н., ведущий научный сотрудник;
Е. П. Вангели, к.б.н., ведущий научный сотрудник;
О. Д. Кучерук, к.в.н., старший научный сотрудник;
М. И. Гулюкин, д.в.н., профессор, академик РАН, директор ВИЭВ
ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко»
Анализ литературных данных показывает, что уже в начальный период применения туберкулиновой пробы некоторые исследователи обратили внимание: не у всех реагирующих животных подтверждается заболевание туберкулезом.
В дальнейшем, все большее число исследователей стало выявлять реагирующих животных с «ложными» реакциями на туберкулин. Впоследствии это редкое явление превратилось в актуальную проблему повсеместного выявления неспецифических реакций.
В настоящее время основой оздоровительных и профилактических мероприятий при туберкулезе крупного рогатого скота является прижизненная аллергическая диагностика болезни внутрикожной туберкулиновой пробой. Известно, что аллергическая реакция на внутрикожное введение туберкулина (или ПЧЗТ – повышенная чувствительность замедленного типа) развивается через 7-45 суток после заражения животных возбудителем туберкулеза. ПЧЗТ к антигенам микобактериальной клетки свидетельствует о контакте организма животного с возбудителем туберкулеза и используется в качестве диагностического теста. В месте внутрикожного введения туберкулина развивается припухлость, достигающая наибольшего развития через 48-72 часа. Длительность образования припухлости определяется временем, необходимым для подхода и скопления в месте введения иммунокомпетентных клеток, взаимодействия их с аллергеном и развития воспалительного процесса.
Многими авторами доказано, что для аллергии характерна высокая специфичность, т.е. чувствительность только к вызвавшим сенсибилизацию организма аллергенам. Эта специфичность обеспечивает высокую эффективность аллергического метода диагностики ряда болезней.
При туберкулезе специфичность аллергии относительна в связи с наличием у M.bovis и НТМБ значительного количества общих антигенов. Поэтому основной недостаток внутрикожной пробы в том, что проявление реакции указывает только на заражение и сенсибилизацию организма животных микобактериями различного вида, т.е. выявляет не только зараженных туберкулезом, но и здоровых животных с неспецифическими реакциями на туберкулин.
В итоге проявление неспецифических реакций на туберкулин у сенсибилизированных НТМБ животных делает внутрикожную туберкулиновую пробу ориентировочной и вызывает необходимость применения дальнейших патологоанатомических и лабораторных исследований с целью подтверждения диагноза на туберкулез.
Неспецифические реакции условно разделяют на парааллергические, когда основной причиной их возникновения является сенсибилизация организма животных различными видами нетуберулезных микобактерий, и псевдоалергические, обусловленные причинами немикобактериального характера.
С момента возникновения проблемы неспецифических реакций были предложены различные методы их дифференциации, но наибольшее признание и распространение во всем мире получил метод симультанной пробы с туберкулином для млекопитающих и для птиц.
Впервые симультанную пробу с использованием альт-туберкулинов для млекопитающих и для птиц предложил N.Plum в 1925 г., а с ППД для млекопитающих и ППД для птиц предложил M.Pavlas в 1965 г.
Применение симультанной пробы основано на видовой специфичности аллергии, проявляющейся более выраженными реакциями на аллерген, родственный по антигенному составу микобактериям, вызвавшим сенсибилизацию животных.
Симультанная проба с применением туберкулинов для млекопитающих и для птиц нашла широкое применение во многих странах мира. На целесообразность использования этой пробы в качестве теста определения видовой специфичности аллергических реакций указывалось в резолюциях XVI (1948) и XVII (1950) генеральных сессий МЭБ.
В начальный период применения симультанной пробы в нашей стране использовали туберкулин для млекопитающих и для птиц. Использование в пробе туберкулина для птиц было вполне оправдано, так как в этот период наиболее частым сенсибилизирующим агентом для крупного рогатого скота являлись микобактерии туберкулеза птичьего вида, имевшие в те времена практически повсеместное распространение. В дальнейшем, после оздоровления птицеводческих хозяйств от туберкулеза птиц, наиболее частыми сенсибилизирующими агентами стали уже другие виды атипичных микобактерий и M.avium–intracellularae. До 1978 года не было утвержденной методики постановки симультанной пробы. Исследования проводили в соответствии с временными методиками дифференциации туберкулиновых реакций с применением ППД для млекопитающих и птиц (в порядке широкого производственного опыта).
Проведенными исследованиями было установлено, что при применении симультанной пробы, одновременно с туберкулином для млекопитающих может использоваться аллерген из любых видов микобактерий, отличающихся от микобактерий туберкулеза. Однако, в связи с тем, что в любой местности микобактериальный фон может изменяться в зависимости от перемещений скота, кормов, подстилочных, строительных и других материалов, была доказана нецелесообразность изготовления и применения разных аллергенов из местных культур микобактерий. Поэтому для практического применения симультанной пробы наиболее оптимальным представляется применение одного комплексного аллергена из микобактерий нескольких видов, являющихся наиболее частой причиной сенсибилизации КРС в различных регионах страны.
В России комплексный аллерген из атипичных микобактерий (КАМ) впервые изготовил и внедрил в производство А.Н.Шаров. С 1978 года Курская биофабрика стала производить КАМ. «Наставление по проведению симультанной аллергической пробы с применением туберкулина и КАМ при диагностике туберкулеза животных» было утверждено ГУВ МСХ СССР 27.11.1978 г. Впоследствии это наставление было пересмотрено и утверждено ГУВ МСХ СССР 04.07.1980 г.
Первоначально КАМ готовили из трех видов атипичных микобактерий: M.kansasii (1 гр.), M.scrofulaceum (2 гр.) и M.intracellularae (3 гр. по Раньону). В дальнейшем, в связи с тем, что M.kansasii на территории нашей страны не выделяется, его исключили из состава КАМ. В настоящее время КАМ готовят из двух видов атипичных микобактерий: M.scrofulaceum и M.intracellularae.
Следует отметить, что в более поздних работах А.Н.Шаров (1989) указывал: с учетом того, что сенсибилизацию организма крупного рогатого скота в разных регионах нашей страны вызывают атипичные микобактерии 2, 3 и 4 групп по Раньону, КАМ должен изготавливаться из микобактерий 2, 3 и 4 групп. В дифференциальной диагностике туберкулеза симультанной пробой основное значение имеет не количество реагирующих животных, а интенсивность проявления аллергических реакций на тот или иной аллерген. В симультанной пробе наряду с ППД для млекопитающих необходимо применять аллерген, изготовленный по методике производства туберкулина, что обеспечивает единообразие химического состава аллергенов. Это необходимо для развития качественно равноценных реакций. Аллергены должны применяться в сопоставимых дозах и быть стандартизированы по биологической активности с целью исключения возможности проявления превосходства одного из них по причине количественного различия.
В соответствии с «Наставлением по диагностике туберкулеза животных», утвержденным ГУВ Госагропрома СССР от 25.02.86 г., для дифференциации аллергических реакций на туберкулины было узаконено применение только симультанной пробы с ППД для млекопитающих и КАМ. А в соответствии с таким же наставлением, утвержденным Департаментом ветеринарии МСХ РФ от 18.11.2002 г., для дифференциации аллергических реакций на туберкулин применяется симультанная проба с ППД для млекопитающих и КАМ и симультанная проба с ППД для млекопитающих и ППД для птиц.
В доступной литературе мало данных по сравнительному изучению эффективности этих проб, а имеющиеся сведения противоречивы.
Так, одни авторы считают, что пробы обладают одинаковой эффективностью, другие считают целесообразным применение ППД для птиц, третьи предпочитают КАМ.
Проведенные в ВИЭВ и ВГНКИ исследования показали некоторое преимущество симультанной пробы с КАМ. А.Н.Шаров (1989), Н.П.Овдиенко (1990), Н.П.Овдиенко и соавт. (1995), А.Х.Найманов (1993), А.Х.Найманов и соавт. (2005, 2006, 2009), Н.Р.Хасанов (2001), Н.П.Помыканов (2005) указывают, что в благополучных хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями, симультанная проба с КАМ обладает большей диагностической значимостью, чем симультанная проба с ППД для птиц.
Основным недостатком симультанной пробы является небольшая ее эффективность, так как, по сообщениям различных авторов из разных регионов, симультанная проба с ППД для млекопитающих и КАМ позволяют дифференцировать неспецифические реакции от 0 до 77% случаев. Кроме того, в соответствии с действующим наставлением, она является групповой и дает возможность ориентироваться в ситуации по туберкулезу лишь в целом по стаду или группе (не менее шести голов) исследуемых животных.
Тем не менее, мы считаем, что главная диагностическая ценность симультанной пробы заключается в том, что при ее применении значительно сокращается количество реагирующих на туберкулин животных. Так, в благополучных хозяйствах, при исследовании реагирующих животных симультанной пробой с ППД для млекопитающих и КАМ, как правило, многие реакции переходят на КАМ или превалируют на КАМ, то есть, в конечном итоге «сужается поиск» животных для диагностического убоя, так как при применении симультанной пробы убою подлежат только животные, более интенсивно реагирующие на туберкулин. При их отсутствии убою подлежат реагирующие в равной степени на ППД для млекопитающих и КАМ.
Проведенные нами многочисленные исследования по изучению возможности дифференциации неспецифических реакций показывают, что учет результатов симультанной пробы с ППД для млекопитающих и КАМ можно проводить по группе животных, а при получении неопределенных результатов исследований следует проводить индивидуальный учет реакций по каждой реагирующей корове, а возможно даже проводить только индивидуальный учет. В последние годы при групповом учете симультанной пробы, действительно, часто стали получать неопределенные результаты исследований.
Поэтому, с учетом всего указанного, в последние годы в ВИЭВ проводятся исследования по совершенствованию КАМ и методики его применения. Так, при изучении сенсибилизирующих свойств НТМБ 4 гр. было установлено, что M.fortuitum и M.smegmatis обладают наибольшими сенсибилизирующими свойствами. Поэтому в состав КАМ-2 ВИЭВ дополнительно включены наиболее часто выделяемые от реагирующих животных и обладающие сенсибилизирующими свойствами быстрорастущие микобактерии 4 гр. M.fortuitum и M.smegmatis, т.е. КАМ-2 составлен из четырех видов атипичных микобактерий: M.scrofulaceum (2 гр.), M.intracellularae (3 гр.), M.fortuitum и M.smegmatis (4 гр.).
Разработан проект «Наставления по применению симультанной пробы с ППД для млекопитающих и КАМ-2», где предусмотрен групповой и индивидуальный учет результатов симультанной пробы.
Заключение
В связи с широким распространением во внешней среде и выделением от реагирующих животных атипичных микобактерий, для дифференциации неспецифических реакций целесообразно использование симультанной пробы с ППД для млекопитающих и КАМ. В связи с тем, что сенсибилизацию организма крупного рогатого скота вызывают НТМБ 2, 3, и 4 гр. по Раньону, изготавливать КАМ необходимо из микобактерий этих групп.
Учет и оценку результатов симультанной пробы следует проводить по группе животных и индивидуально по каждой реагирующей корове.
Литература
1. Найманов А.Х. Аллергическая диагностика микобактериальных инфекций крупного рогатого скота: автореф. дисс. докт. вет. наук. – Москва, 1993. – 29 с.
2. Найманов А.Х., Овдиенко Н.П., Помыканов Н.П. и др. Сравнительное изучение симультанной пробы с ППД туберкулином для млекопитающих и для птиц с симультанной пробой с ППД туберкулином для млекопитающих и КАМ // Сборник трудов, посвящ. 70-летию ДальЗНИВИ. – Благовещенск, 2005. – С. 31 – 35.
3. Найманов А.Х., Овдиенко Н.П., Помыканов Н.П. и др. Сравнительное изучение симультанной пробы с ППД туберкулином для млекопитающих и птиц с симультанной пробой ППД туберкулином для млекопитающих и КАМ // Мат. междунар. научн.-практ. конферен. «Актуальные проблемы инф. патологии и иммунологии животных». – Москва, 2006. – С. 303 – 306.
4. Найманов А.Х. Диагностическая ценность различных тестов, используемых в ветеринарной практике для прижизненной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота // Ветеринарный консультант. – 2008. – №15 (178). – С. 15 – 21.
5. Найманов А.Х. Сравнительная оценка прижизненных методов диагностики туберкулеза крупного рогатого скота // Ветеринария. – 2009. — №2. – С. 7-14.
6. Овдиенко Н.П., Найманов А.Х., Помыканов П.Н. и др. Совершенствование симультанной пробы с ППД туберкулином для млекопитающих и КАМ // Тезисы докл. науч. — практ. конф. «Основные научные иссл. по проблеме туберкулеза и бруцеллеза с.-х. ж-х». – Новосибирск, 1995. – С. 44.
7. Овдиенко Н.П. Эпизоотология и диагностика туберкулеза крупного рогатого скота в условиях интенсификации животноводства: дисс. докт. вет. наук. – Москва,1990. – 440 с.
8. Помыканов Н.П. Совершенствование диагностики туберкулеза крупного рогатого скота в индивидуальных хозяйствах: автореф. дисс. канд. вет. наук. – Москва, 2005. – 23 с.
9. Хасанов Н.Р. Совершенствование дифференциальной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота: дисс. канд. вет. наук. – Душанбе, 2001. – 105 с.
10. Шаров А.Н. Аллергическая диагностика туберкулеза у животных: повышение ее эффективности: дисс. докт. вет. наук. – Москва, 1989. – 373 с.
