Автор:

Али Найманов

Рубрика:

Актуальные проблемы туберкулеза и паратуберкулеза животных

О.А.Верховский, А.Х.Найманов, О.А.Савицкая
Всероссийский НИИ экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко, г. Москва

Туберкулез крупного рогатого скота, этиологическим агентом которого является Mycobacterium bovis, продолжает оставаться одной из наи­более сложных проблем инфекци­онной патологии во многих странах мира, включая Россию. На современном этапе борьбы с туберку­лезом основой профилактических и оздоровительных мероприятий была и остается диагностика этой болезни. Разработка современных диагностических ме­тодов требует деталь­ного понимания механизмов иммун­ного ответа на различные анти­гены M.bovis. Результаты многочисленных исследований показали, что при инфи­цировании млекопитающих M.bovis доминирую­щим является клеточный иммунный от­вет, в который вовле­чены Т-клетки, макрофаги и цитокины [1, 7]. Было установлено, что у крупного рогатого скота активация WC1⁺ g/d-Т клеток играет важнейшую роль при инфекции, обусловленной микобакте­риями. Эти клетки спо­собны супрес­сировать антиген-специфическую пролиферацию a/b-Т кле­ток и форми­руют иммунный ответ как in vivo, так и in vitro на различные антигены M.bovis, результатом которого является усиленный синтез g-ин­терферона (g-ИФН), фактора некроза опухолей-b и интерлей­кина-2 [3-6]. В настоя­щее время определение g-ИФН иммуноферментным методом (g-ИФН ИФА) является одним из основных прижизненных диаг­ностических мето­дов оценки Т-клеточного иммун­ного ответа при тубер­кулезе.

Целью настоящей работы было изучение дина­мики содержания g-ИФН в крови экспериментально зараженных бычков и сравнительное изучение диагно­стической ценности внутрикожной туберкулиновой пробы (ВТП) и g-ИФН ИФА в экспериментальных условиях.

Материалы и методы

Экспериментальные животные

Опыт был проведен в Вышневолоцком отделе ВИЭВ (о.Лисий): на девяти бычках, сформированных в две группы (опытная и контроль­ная) по прин­ципу аналогов. Животные первой группы (n=6) были заражены вирулент­ной культурой M.bovis «8», животные второй (n=3) – служили контролем. Заражение шести экспериментальных особей проводили алиментарно, че­ты­рехкратно в дозе 0,2 мг культуры M.bovis на кг живого веса животного. Первые три введения культуры M.bovis (в дозе 20 мг/животное) про­водили ежедневно, четвертое – проводили через семь суток после третьего в той же дозе и тем же способом.

Прижизненные исследования проводили в процессе постинфекционного им­муногенеза на 0, 7, 14, 21, 28, 35, 65, 85, 110 и 135 сутки после заражения (п.з.) с использованием аллергической пробы и g-ИФН ИФА, посмертные – сразу же после убоя животных (через год п.з.).

Аллергические и лабораторные исследования на туберкулез

 Исследования внутрикожной туберкулиновой пробой, патологоанато­мические исследования убитых животных и лабораторные исследования пат­материала от этих особей проводили в соответствии с «Наставлением по диагностике туберкулеза животных» (2002).

g-ИФН ИФА

В исследованиях был использован коммерческий ИФА-набор (BOVI­GAM^TM Bovine Gamma Interferon test, CSL Veterinary, Australia), любезно предоставленный проф. J.D.Col­lins (Университет Дублина, Ирландия), а также ППД- туберкулин для млекопитающих и ППД- туберкулин для птиц зарубежного (Institute for Animal Science and Health, Нидерланды) и отечественного (ФГУП «Кур­ская биофабрика») производства. Постановку реак­ции, учет и интерпретацию полученных ре­зультатов проводили по мето­дикам, рекомендованным фирмой-производителем в нашей модифика­ции. Уровень g-ИФН в каждой испытуемой пробе крови оценивали по индексу ОП 450 (И_оп), вычисляемому по соответствующей формуле [2, 8].

Результаты исследований

Результаты ИФА по определению динамики содержания g-ИФН в крови телят опытной группы в процессе постинфекционного иммуногенеза свидетельствовали о том, что Т-клеточный иммунный ответ форми­ровался у всех экспериментально зараженных животных (табл. 1).

Таблица 1. Уровень g-ИФН в крови телят, экс­пе­римен­тально

зараженных M. bovis .

                                               

Время п.з., сутки	Значение Иоп у теленка:
	№1	№2	№3	№4	№5	№6
0	—	—	—	—	—	—
7	—	—	—	—	—	—
14	—	—	—	—	—	—
21	—	—	—	—	—	—
28	—	—	—	—	—	—
35	3,2	—	—	—	—	—
65	7,5	2,5	—	2,0	—	4,5
85	6,1	5,0	—	3,6	3,4	8,0
110	6,4	6,7	3,0	5,6	4,4	7,0
135	5,1	7,6	3,0	5,0	4,0	9,5

При этом у опытных животных установлены различия в сроках появления и относительном содержании g-ИФН в крови. Кроме того, анализ полученных нами данных показал, что в большинстве случаев после дос­тижения своего максимального значения уровень g-ИФН в крови имел вы­раженную тенден­цию или к своему снижению (у трех бычков), или к увели­чению (у двух бычков).

Одновременно с проведением исследований по изучению динамики формирования постинфекционного g-ИФН – иммунного ответа у зараженных бычков – на этой же экспериментальной модели нами была решена еще одна за­дача данного опыта. Речь идет об оценке диагностической ценности ВТП и g-ИФН ИФА. Анализ полученных результатов позволил констатировать 100% совпа­дение результатов двух методов на 135-е сутки после заражения, однако диагностиче­ское повышение уровня g-ИФН, установ­ленное мето­дом ИФА, происходило на 20–50 суток раньше, чем была за­регистриро­вана реакция на внутрикожное введение туберкулина.

Последующие посмертные исследования (патологоанато­мические, культуральные и биологиче­ские) животных позволили подтвердить заболевание туберкулезом двух бычков опытной группы из шести зараженных. Результаты посмертных и прижизненных исследований живот­ных кон­трольной группы методами ВТП и g-ИФН ИФА были отрицатель­ными в течение всего периода эксперимента.

Заключение

Таким образом, в результате проведенной работы была изучена динамика формирования Т-клеточного иммунного ответа у экспериментально зараженных M.bovis бычков. Получены новые данные о сроках по­явления и максимального содержания g-ИФН в крови зараженных тубер­кулезом животных в процессе постинфекционного иммуногенеза. При этом, ус­тановленные времен­ные показатели диагностического появления g-ИФН в крови могут служить ориентиром при оценке иммунного ответа животных, инфицированных M.bovis.

Кроме того, обобщив полученные результаты можно сделать вывод о том, что g-ИФН ИФА по своим основополагающим характеристикам, наряду с внутрикожной туберкулиновой пробой, представляет несомненную диагностическую ценность в каче­стве дополнительного метода прижиз­ненного выявления зараженных M.bovis животных.

Список литературы

1. Katial R. K., Hershey J., Purohit-Seth T. et al. // Clin. Diagn. Lab. Immu­nol., 2001, 8:339-345.

2. Pollock J. M. and Andersen P. // In­fect. Immun., 1997, 65:2587-2592.

3. Ng K. H., Aldwell F. E., Wedlock N. et al. // Vet. Immunol. Immunopa­thol., 1997, 57:59-68.

4. Rhodes S.G., Hewinson R.G., Vordermeier H.M. // J.Immunology, 2001, 166: 5604-5610.

5. Rojas R., Balaji K. N., Subramanian A., Boom W. H. // Infect. Immun., 1999, 67: 6461-6465.

6. Smyth A. J., Welsh M. D., Girvin R. M. and Pollock J. M. // Infect. Im­mun. 2001, 69:5889-5896.

7. Thorns C.J. and Morris J.A. // Vet. Bull., Weybridge, 1983, 53, 543-550.

8. Wedlock D.N, Vesosky B., Skinner M.A. et al. // Infect. Immun., 2000, 68:5809-5815.

• туберкулез
• КРС
• крупный рогатый скот
• диагностика