Актуальные вопросы аллергической диагностики туберкулеза КРС методом внутрикожной туберкулиновой пробы
Али Найманов
Найманов А.Х., Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им.Я.Р.Коваленко, г. Москва, Россия.
24 марта 1882 года Р.Кох сделал сообщение в Берлинском обществе физиологов об открытии возбудителя туберкулеза, а 14 октября 1890 года на Х международном медицинском конгрессе он сообщил об изготовлении им из туберкулезных бактерий особого препарата для лечения заболевания. Однако этот препарат не оправдал надежд при лечении туберкулеза, поэтому в дальнейшем разработку стали использовать как диагностическое средство.
В 1890 году О.Ф.Буйвид также изготовил по собственной методике вытяжку их туберкулезных бактерий и назвал этот препарат туберкулином.
В 1895 году в Берне на интернациональном конгрессе по предложению О.Банга и М.Нокара была принята резолюция о туберкулине: «Туберкулин представляет чрезвычайно ценное диагностическое средство и в борьбе с туберкулезом может оказать весьма большие услуги».
Со времени изготовления туберкулина было предложено много методов его применения с диагностической целью: подкожный, накожный, глазной, внутрикожный, внутривенный, пальпебральный, вагинальный, назальный и т.д. Однако дальнейшие сравнительные изучения различных методов введения туберкулинов показали, что наиболее чувствительным, удобным и обладающим большими диагностическими преимуществами является внутрикожный метод. Так, в 1938 году, на XVIII международном ветеринарном конгрессе было признано, что аллергическая туберкулиновая проба – это основной метод выявления больных животных, а наиболее надежным способом туберкулинизации крупного рогатого скота является внутрикожная проба.
Внутрикожная проба впервые была предложена Муссю и Манту в 1908 году, а в последующие годы стала основным методом туберкулинизации животных во всех странах мира.
Двукратное введение туберкулина было предложено специальной комиссией Британского министерства сельского хозяйства в 1925 году на основании опытов по применению альт-туберкулина. Этой же комиссией в 1947 году были проведены подобные исследования с ППД-туберкулином для млекопитающих. Установлено, что однократная проба более точна, проста в исполнении и обладает такой же диагностической ценностью, как и двукратное введение туберкулина. Поэтому в 1947 году решением Британского министерства сельского хозяйства в Англии введена однократная внутрикожная проба вместо двукратной.
В дальнейшем метод однократной внутрикожной туберкулиновой пробы был принят и в других государствах Западной Европы, а также в Америке и Африке. Ликвидация туберкулеза во многих из этих стран показала и доказала достаточную эффективность однократной туберкулиновой пробы. В настоящее время двукратная внутрикожная проба не применятся ни в одной стране мира, и этот вопрос ни у кого не вызывает сомнений.
В СССР двойную внутрикожную пробу начали применять с 1926 года, после доклада о ней на первом Всероссийском ветеринарном научно-организационном съезде П.П.Вишневского. С 1940 года этот метод был узаконен в нашей стране как основной метод туберкулинизации крупного рогатого скота в благополучных и неблагополучных по туберкулезу стадах. Причем первое введение туберкулина считалось сенсибилизирующим, второе – разрешающим (М.К.Юсковец,1940).
Следует отметить, что в этот период аллергические исследования на туберкулез проводили внутрикожной туберкулиновой пробой с использованием альт-туберкулина для млекопитающих, и не было проблемы неспецифических реакций. Учет аллергических реакций проводили через 72 часа после первой туберкулинизации и через 24 часа после повторного введения туберкулина. Реакцию считали положительной при наличии на месте введения воспалительной припухлости и увеличении толщины кожной складки на 5 мм и более, сомнительной считали реакцию при увеличении кожной складки на 3-4 мм, отрицательной – при увеличении кожной складки менее 3 мм.
Туберкулины для ветеринарных целей в нашей стране готовили в ВИЭВ, а с 1931 года производство туберкулина было передано Курской биофабрике. Основным средством прижизненной диагностики туберкулеза животных являлся альт-туберкулин для млекопитающих, а с 1971 года на Курской биофабрике было налажено промышленное производство ППД-туберкулина для млекопитающих.
Исследования ППД-туберкулином для млекопитающих проводили также методом двойной внутрикожной пробы с учетом аллергических реакций через 72 часа после первого введения и через 24 часа после повторного введения. Положительной считали реакцию на месте введения при увеличении толщины складки на 4 мм и более, сомнительной – на 2-3 мм, отрицательной – менее 2 мм.
Следует отметить, что до 60-х годов прошлого века аллергическая диагностика внутрикожным методом туберкулинизации не вызывала сомнений в правильности прижизненной диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота. Основной целью проведения прижизненных диагностических исследований было максимальное выявление реагирующих на туберкулин животных. Поэтому учет аллергических реакций проводили через 72 часа после первого и через 24 часа после второго введения туберкулина. Хотя и тогда было известно, что у больного КРС аллергические реакции начинают проявляться сразу после внутрикожного введения туберкулина (через 20-30 минут), а в дальнейшем к 24, 48 и 72 часам идет постепенное увеличение интенсивности проявления аллергических реакций. Затем к 96, 120 часам следует постепенное снижение интенсивности реакции. У здоровых животных в благополучных хозяйствах реакции на введение аллергена также начинают проявляться через 20-30 минут, однако у большинства животных к 24-48 часам воспалительные явления в месте введения туберкулина исчезают, а у некоторой части особей остаются. Так, В.П.Миловзоров, В.С.Рягузов (1934), С.Н.Вышелесский (1935) указывали, что реакции на внутрикожное введение туберкулина развиваются в течение нескольких часов, а у части животных сохраняются до 24-48 часов после введения туберкулина.
Поэтому применение двойной внутрикожной пробы с учетом результатов исследований через 72 часа после первого и через 24 часа после второго введения туберкулина особых проблем не вызывало. Однако в дальнейшем, в связи с увеличением проблемы выявления неспецифических реакций, практические ветеринарные врачи все чаще стали сомневаться в правильности диагностики.
В связи с жалобами на качество туберкулина, в 1975 году была создана комиссия ГУВ МСХ СССР по проверке качества отечественных туберкулинов, выпускаемых Курской биофабрикой, в сравнении с туберкулинами фирмы «Дессау», Германия.
Комиссия в 1976-1977 гг. провела сравнительное изучение активности и специфичности отечественных и зарубежных туберкулинов в благополучных и неблагополучных по туберкулезу хозяйствах в различных регионах страны. В результате проведённых исследований были сделаны следующие основные выводы и предложения: туберкулины, выпускаемые Курской биофабрикой, активны и специфичны; ППД-туберкулины для млекопитающих производства Курской биофабрики и фирмы «Дессау» равноценны по активности и специфичности; для диагностики туберкулеза в благополучных и неблагополучных хозяйствах предложен однократный метод внутрикожного введения туберкулина; изменены критерии оценки аллергических реакций на однократное введение туберкулина. В частности, исключена категория сомнительно реагирующих животных и оставлены две категории оценки – реагирующие и нереагирующие животные. Также было предложено реагирующими считать особей с увеличением толщины кожной складки на 3 мм и выше, нереагирующими – менее 3 мм.
Все указанные предложения и изменения вошли в «Наставление по применению туберкулинов для аллергической диагностики туберкулеза у млекопитающих и птиц», утвержденные ГУВ МСХ СССР 9 февраля 1978 года, а затем и в «Наставление по диагностике туберкулеза животных», утвержденные ГУВ Агропромом СССР 25 февраля 1986 года. То есть, в 1978 году двукратную внутрикожную пробу в нашей стране также отменили. Однако в дальнейшем, в связи с противоречивым мнением разных авторов по применению двукратной пробы для диагностики в неблагополучных хозяйствах, в «Инструкции о мероприятиях по профилактике и ликвидации туберкулеза животных», утвержденной ГУВ Госагропрома СССР 10 ноября 1988 года, было указано: «Всех животных неблагополучной фермы каждые 60 дней исследуют аллергической внутрикожной туберкулиновой пробой. Допускается исследовать животных двойной внутрикожной туберкулиновой пробой». Имелось в виду, что если можете оздоравливать неблагополучные хозяйства однократной или двукратной пробами – то оздоравливайте любым методом. В итоге было принято компромиссное решение вопроса.
Однако в санитарных и ветеринарных правилах «Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных», утвержденных Госкомсанэпиднадзором и Департаментом ветеринарии МСХ РФ 18 июня 1996 года, слово «допускается» почему-то исчезло.
Тем не менее, в «Наставлении по диагностике туберкулеза животных», утвержденного Департаментом ветеринарии МСХ РФ 18 ноября 2002 года, указано: «В неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота пунктах допускается применение двойной туберкулиновой пробы». То есть, сложилась ситуация, когда утвержденные нормативные документы по методам диагностики не соответствуют друг другу. Кроме того, более жесткие критерии оценки аллергических реакций (реагирующими считаются животные с увеличением кожной складки на 3 мм и выше), предназначенные специально для однократной внутрикожной пробы, оказались критериями оценки аллергических реакций и на двукратное введение туберкулина.
В настоящее время мероприятия по профилактике и борьбе с туберкулезом животных в нашей стране проводятся в соответствии с санитарными и ветеринарными правилами «Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных» и «Наставлениями по диагностике туберкулеза животных».
В санитарных и ветеринарных правилах указано, что при оздоровлении неблагополучных стад от туберкулеза методом систематических исследований с убоем больных животных всех особей с двухмесячного возраста через каждые 45-60 дней исследуют двойной внутрикожной туберкулиновой пробой.
В «Наставлении по диагностике туберкулеза животных» указано: «В неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота пунктах допускается применении двойной туберкулиновой пробы». С этой целью животным, не реагировавшим на первое введение туберкулина, препарат вводят повторно в день учета реакции в той же дозе и в то же место. Учеёт реакции на второе введение проводят через 24 часа. Реагирующими считают животных при утолщении кожной складки на 3 мм и более, независимо от характера припухлости.
В наставлении стандартов для диагностических тестов и вакцинаций для стран Европейского сообщества (Office International des Epizooties Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines, 2000) указано, что стандартным методом для обнаружения туберкулеза бычьего вида является внутрикожная туберкулиновая проба с определением утолщения кожной складки через три дня после введения аллергена, то есть, регламентируется применение однократной внутрикожной туберкулиновой пробы с учетом аллергических реакций через 72 часа после введения туберкулина.
На своевременном этапе борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота вопрос о диагностической ценности двукратной внутрикожной пробы является дискуссионным только в нашей стране. Так, одни отечественные авторы считают, что при применении двукратной пробы в неблагополучных хозяйствах довыявляются реагирующие на туберкулин животные, у которых до 40% случаях подтверждается туберкулез. Другие считают, что при применении двукратной пробы выявляются в массовом количестве только реагирующие животные с неспецифическими реакциями.
Поэтому следует особо отметить, что в последние годы все больше повышается актуальность проблемы неспецифических реакций на туберкулин при диагностике КРС на указанное заболевание. Так, в 2001 году в России было выявлено всего 103 720 реагирующих животных, из них в неблагополучных пунктах – 13 543 (13%), в благополучных стадах – 90 177 (87%). В 2007 году выявлено реагирующих всего 45 952, из них в н.п. – 4 056 (8,8%), в благополучных стадах – 41 896 (91,1%). Представленные данные показывают, что в настоящее время в благополучных по туберкулезу хозяйствах РФ выявляется более чем в 10 раз больше реагирующих животных, чем в неблагополучных хозяйствах. Проблема дифференциации неспецифических реакций на туберкулин при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота в благополучных хозяйствах является самой актуальной проблемой.
Кроме того, известно, что при значительном распространении туберкулеза проблема неспецифических реакций, как правило, не возникает. Проблема неспецифических реакций становится все более актуальной по мере сокращения количества неблагополучных пунктов и уменьшением количества больных животных. В неблагополучных хозяйствах эта проблема может возникать по мере оздоровления хозяйства, т.е. в конечной стадии оздоровления, в период проведения контрольных диагностических исследований. При этом показателями возможного проявления неспецифических реакций являются случаи, когда при контрольных исследованиях количество реагирующих животных не уменьшается, а при диагностическом убое реагирующих особей наличие туберкулеза не удается подтвердить неоднократно проведенными патологоанатомическими и лабораторными исследованиями.
С этим распространенным явлением сталкивались во всех странах мира, ведущих усиленную борьбу с заболеванием, в период завершения этой борьбы и после ликвидации туберкулеза. Поэтому увеличение проблемы неспецифических реакций в нашей стране можно оценивать и как показатель оздоровления КРС.
Так, по данным официальной ветеринарной статистики в Российской Федерации на 01.01.1987 года было зарегистрировано 1945 неблагополучных пунктов, выявлено 242,1 тысяч больных туберкулезом животных, характерные изменения обнаружены у 130,4 тысяч убитого крупного рогатого скота.
На 01.01.2008 года в Российской Федерации осталось 56 неблагополучных пунктов, в течение 2007 года было выявлено 4056 больных туберкулезом животных, сдано на убой 7 460 318 голов крупного рогатого скота, из них 7 564 реагировавших на туберкулин. Характерные для туберкулеза изменения обнаружены у 2 186 животных, то есть, у 0,03% убитых и 28,9% реагировавших на туберкулин животных.
В последние годы в России все чаще регистрируются случаи проявления неспецифических реакций на туберкулин в неблагополучных, оздоравливаемых от туберкулеза хозяйствах, то есть увеличивается проявление так называемой смешанной микобактериальной инфекции.
В соответствии с санитарными и ветеринарными правилами оздоровление неблагополучных хозяйств проводится двумя методами:методом полной замены неблагополучного стада здоровыми животными и методом систематических диагностических исследований с выделением и убоем больных особей.
В ветеринарной практике нашей страны наиболее широко применяется оздоровление методом систематических исследований и убоя реагирующих на туберкулин животных. Реагирующих считают больными и сдают на убой. Аллергические исследования и убой всех реагирующих особей проводят до получения двух подряд отрицательных результатов аллергических исследований по всему стаду.
При этом совершенно не учитывается возможность наличия в неблагополучных хозяйствах так называемой смешанной микобактериальной инфекции (М. bovis, M. tuberculosis и различные виды нетуберкулезных микобактерий). Известно, что неспецифические реакции, вызываемые атипичными микобактериями, в отличие от реакций, вызываемых микобактериями туберкулеза, в основном проявляются незначительным увеличением толщины кожной складки (на 3-5 мм) и являются нестабильными, т. е. у одних животных эти реакции выявляются, затем исчезают, но появляются у других особей. Поэтому от этих реакций невозможно избавиться методом убоя реагирующих. В практических условиях, при наличии в неблагополучных стадах животных с неспецифическими реакциями на туберкулин, можно годами исследовать на туберкулез, перебить стадо и не получить отрицательного результата аллергических исследований (тем более, при применении двойной внутрикожной пробы и учете реакции с 3 мм).
То есть, в таких случаях у практикующих ветеринарных специалистов остается только один выход – оздоравливать хозяйства методом полной замены поголовья скота, что не совсем реально, особенно в крупных животноводческих хозяйствах.
В связи с указанным, в последние годы созрела необходимость пересмотра санитарных и ветеринарных правил от 1996 г., а в дальнейшем и «Наставления по диагностике туберкулёза животных» от 2002 г.
ВИЭВ совместно с ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», ВНИИБТЖ, ИЭВСиДВ, ВГНКИ, ДальЗНИВИ и Прикаспийский ЗНИВИ разработали проект «Правил о мероприятиях по борьбе с туберкулезом животных».
Основные изменения и дополнения в новых Правилах заключается в следующем. В проекте новых «Правил о мероприятиях по борьбе с туберкулезом животных» по эпизоотическому состоянию туберкулёза все общественные хозяйства условно разделены на четыре категории: благополучные хозяйства, благополучные хозяйства, где выявляются реагирующие животные с неспецифическими реакциями, неблагополучные по туберкулезу хозяйства и неблагополучные хозяйства со смешанной микобактериальной инфекцией.
Кроме того, в связи с особенностями диагностики туберкулеза в индивидуальных хозяйствах выделена отдельная, пятая, категория хозяйств. Мероприятиям по выявлению заболевания в личных подворьях граждан посвящена отдельная глава.
В этих пяти категориях хозяйств, с учетом особенностей диагностики и целей, предлагается специальный комплекс диагностических исследований, для каждой из групп.
1. Благополучные хозяйства – хозяйства, в которых не выявляются реагирующие на туберкулин животные.
В этих хозяйствах следует применять более щадящие методы диагностики и критерии оценки аллергических реакций, так как основная цель диагностики – контроль за благополучием хозяйств, а в случае возникновения туберкулеза – быстрое и точное выявление хотя бы одного больного животного в самом начале возникновения заболевания.
Поэтому в благополучных хозяйствах предлагается исследовать животных два раза в год с интервалом шесть месяцев одной однократной внутрикожной туберкулиновой пробой, с обязательным диагностическим убоем реагирующих особей и лабораторным исследованием на туберкулез патматериала от убитых животных.
Учитывая, что туберкулез – хроническая инфекция, считаем, что этих исследований вполне достаточно для контроля за благополучием хозяйств.
2. Благополучные хозяйства, где выявляются реагирующие на туберкулин животные.
В этих хозяйствах следует повысить специфичность исследований методом подбора различных туберкулинов и диагностических тестов с целью отбора для убоя из большого количества реагирующих животных двух-трех особей с наиболее характерными показаниями на несколько диагностических тестов.
С этой целью предлагается применять однократную внутрикожную туберкулиновую пробу с ППД-туберкулином для млекопитающих, переисследование реагирующих животных пальпебральной, глазной и внутривенной туберкулиновой пробами, исследование поголовья скота симультанной туберкулиновой пробой с использованием ППД-туберкулина для млекопитающих и КАМ, или ППД-туберкулина для млекопитающих и ППД-губеркулина для птиц, а также изоляцию реагирующих животных и переисследование их через 43-60 дней – с целью установления выпадения или повторения аллергических реакций.
Ценность предлагаемого комплекса исследований заключается в том, что с диагностической целью убивают несколько реагирующих животных, а основное поголовье реагирующих особей остается в стаде.
3. Неблагополучные по туберкулезу хозяйства.
Как уже было сказано, оздоровление неблагополучных хозяйств проводят двумя методами: методом полной замены и методом систематических диагностических выделений и убоя реагирующих животных.
В ветеринарной практике нашей страны наиболее широко применяется оздоровление методом систематических исследований и убоя реагирующих животных. При этом методе оздоровления всех животных, начиная с двухмесячного возраста, через каждые 45-60 дней исследуют однократной внутрикожной пробой до получения двух подряд отрицательных результатов аллергических исследований. «В целях довыявления больных туберкулезом животных допускается применение двукратной внутрикожной пробы до получения отрицательных результатов патологоанатомических исследований у убитых животных. При отсутствии патологоанатомических изменений у реагировавших на двойную внутрикожную пробу животных дальнейшие аллергические исследования неблагополучного поголовья скота проводят однократной внутрикожной туберкулиновой пробой». То есть, предлагается компромиссное решение указанной проблемы.
4. Неблагополучные хозяйства со смешанной микобактериальной инфекцией.
В соответствии с действующими правилами, в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах все реагирующие на туберкулин животные считаются зараженными и подлежат сдаче на убой в течение 15 дней после аллергических исследований.
При этом не учитывается возможность наличия в неблагополучных хозяйствах смешанной микобактериальной инфекции (то есть, одновременное инфицирование животных микобактериями туберкулеза бычьего вида, человеческого вида, птичьего вида и различными видами нетуберкулезных атипичных микобактерий).
Следует отметить, что сенсибилизация животных нетуберкулезными микобактериями характеризуется непостоянством проявления аллергических реакций. Так, неспецифические реакции проявляются у одних животных, затем через 2-6 месяцев исчезают, чтобы потом проявиться у других. В связи с указанным, методом убоя реагирующих особей практически невозможно избавиться от этих реакций.
Поэтому, учитывая сложившуюся в стране ситуацию по туберкулезу и актуальность проблемы неспецифических реакций, мы выделили четвертую категорию хозяйств – неблагополучные по туберкулезу хозяйства со смешанной микобактериальной инфекцией. В этих хозяйствах рекомендуются исследования на туберкулез проводить симультанной пробой с применением ППД-туберкулина для млекопитающих и КАМ, или ППД-туберкулина для млекопитающих и ППД-туберкулина для птиц. Также рекомендуется проводить выборочный диагностический убой реагирующих на туберкулин животных с обязательным лабораторным исследованием патматериала от убитых до получения трехкратных отрицательных результатов лабораторных исследований. При получении трехкратных отрицательных результатов лабораторных исследований оздоравливаемое стадо следует считать благополучным по туберкулезу (независимо от количества выявленных реагирующих животных). Дальнейшие исследования и контроль за благополучием хозяйств проводить, как в благополучных хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных нетуберкулезными микобактериями.
5. Пятая – отдельная категория – мероприятия по выявлению туберкулеза в индивидуальных хозяйствах.
В этой графе вносится специальный комплекс диагностических исследований с целью дифференциации неспецифических реакций на туберкулин в индивидуальных хозяйствах.
Специальный комплекс методов включает применение симультанной пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих и птиц, симультанной пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих и КАМ с индивидуальным учетом по каждому животному, также комплексное применение внутрикожной, пальпебральной и глазной туберкулиновых проб с индивидуальным учетом реакций по каждой особи. И, наконец, исследование реагирующих животных внутривенной туберкулиновой пробой.
В конце проекта новых правил впервые внесена графа «Ветсанэкспертиза мяса и мясных продуктов при туберкулезе животных», где подробно указано, как перевозить больных и реагирующих на туберкулин животных, где и как проводить убой, как проводить ветсанэкспертизу туш и внутренних органов при туберкулезе животных.
Считаем, что на современном этапе борьбы с туберкулезом предлагаемого комплекса исследований вполне достаточно для улучшения диагностики заболевания в общественных и индивидуальных хозяйствах РФ.
Проект новых правил в 2006 году был рассмотрен на координационном совещании исполнителей тем по туберкулезу в ВИЭВ, в 2007 году обсуждался и был одобрен членами рабочей группы по туберкулезу животных Департамента ветеринарии и животноводства МСХ РФ, а затем представлен для утверждения в Департамент ветеринарии и животноводства МСХ РФ. К сожалению, до настоящего времени новые правила не утверждены.
В заключение следует отметить, что внутрикожная туберкулиновая проба, как и все другие известные в настоящее время методы прижизненной диагностики туберкулеза, имеет определенные недостатки. Преимуществом внутрикожной пробы является простота, доступность и главное – возможность ее применения ветеринарными специалистами в широкой практике. При правильном использовании, в комплексе с другими дополнительными методами, внутрикожная туберкулиновая проба и в настоящее время остается основным методом прижизненной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота.
