Применение booster effect для довыявления больных туберкулезом животных
Али Найманов
А.Х. Найманов, В.И. Косенко, И.С.Дубовой
Оздоровление неблагополучных по туберкулезу хозяйств в основном проводят методом выявления и убоя зараженного туберкулезом скота с применением внутрикожной аллергической пробы с ППД–туберкулином для млекопитающих. Однако туберкулиновая проба не всегда выявляет всех больных туберкулезом животных (Д.Д. Новак, 1977; В.П. Урбан и соавт., 1981; А.Н. Кузин, 1987; Ю.Я. Кассич и соавт., 1981; Н.П. Овдиенко и соавт., 1981; А.Х. Найманов и соавт., 1990, 1993 и др.).
Не реагирующие на туберкулин больные животные остаются в стаде, то есть, в оздоравливаемом стаде остается источник возбудителя инфекции, что приводит к длительному неблагополучию и даже нерезультативности мероприятий. Поэтому при длительном неблагополучии или значительном распространении туберкулеза оздоровление стад рекомендуется проводить методом полной замены всего поголовья. Однако не всегда и не везде имеются возможности проводить оздоровление этим методом. Изыскание возможности дополнительного выявления больных туберкулезом животных остается актуальным вопросом диагностики заболевания. В зарубежной медицинской литературе описывается так называемый «booster effect», или возможность повышения чувствительности к туберкулину у пожилых людей путем нескольких введений препарата с различным интервалом. S.J.Burslin, J.A.Musprat, G.H.Rossing (1986) изучали феномен, называемый эффектом усиления (booster effect). Авторы провели три пробы с интервалом в три недели на 162 больных людях. На первом введение выявили 12,3%, на втором – 5 ,5% , на третьем – 3,1% положительно реагирующих. Авторы считают, что у хронически больных туберкулезом людей только серия кожных туберкулиновых тестов дает достоверные сведения о чувствительности к туберкулину.
J.M.Cauthen, D.E.Snider (1986), изучали применение двух–трех проб с интервалом в одну–три недели. При этом 8,7–31,0% людей реагировали только на третьей введение. Авторы считают целесообразным применение у ослабленных и пожилых людей двухэтапного метода диагностики, где первая проба – инициальная, затем еще две пробы как более чувствительные. J.Seutkin, E.J.Rcrez (1986) изучали значение туберкулиновой пробы при введении через двое и через семь суток у 411 людей (средний возраст 74,1 года). Положительную реакцию выявили у 32% людей, причем у 6% реакции выявлены на второе введение, у 5% – на третье. Авторы рекомендуют всем людям старше 50 лет проводить этапную туберкулинизацию, что позволит полнее выявить зараженных туберкулезом людей.
В отечественной и зарубежной ветеринарной литературе работ по применению booster effect при аллергической диагностике туберкулеза с целью довыявления зараженных туберкулезом животных мы не обнаруживали.
Имеются работы по применению двукратного и даже трехкратного способов внутрикожного применения туберкулинов. Сущность их заключается в повторном введении туберкулинов через 72 часа и учете реакции через 24 часа после каждого введения туберкулина. В связи с широким распространением во всем мире и в нашей стране неспецифических реакций на туберкулин, целесообразность применения двукратного (тем более трехкратного) способа введения туберкулинов по этой методике весьма спорна и проблематична. Как установили многие авторы, при повторных введениях туберкулинов и учете реакции через 24 часа воспалительные явления в месте введения не успевают исчезнуть. В результате этого до 15,0% (а при сенсибилизации атипичными микобактериями и до 80,0%) здоровых коров могут давать увеличение толщины кожной складки, в основном 3–5 мм. Эти животные считаются реагирующими и подлежат убою. Кроме того, бесспорным является и факт, что двукратная туберкулиновая проба тоже недовыявляет зараженных животных в неблагополучных хозяйствах. Поэтому, в связи с актуальностью проблемы и неизученностью в ветеринарной практике booster effect в целях довыявления зараженных туберкулезом животных в неблагополучных хозяйствах, мы поставили задачу изучить эффективность этого метода при диагностике, в частности при оздоровлении неблагополучных хозяйств.
Материалы и методы
Работу провели на 160 коровах в одном благополучном по туберкулезу хозяйстве, на 988 коровах в четырех благополучных хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями и на 2018 коровах в четырех неблагополучных по туберкулезу хозяйствах. Аллергические исследования проводили методом внутрикожной пробы с ППД–туберкулином для млекопитающих в дозе 10 000 ТE в 0,2 мл растворителя. Туберкулин вводили безыгольным инъектором БИ-7 в среднюю треть шеи каждому животному трехкратно, в одно и то же место с интервалом между введениями семь суток. Учет реакции проводили через 72 часа после первого, второго и третьего введения туберкулина. Реагирующими считали животных с увеличением толщины кожной складки на 3 мм и выше. В неблагополучных по туберкулезу хозяйствах убили 71 корову, реагирующую на первое, второе и третье введения туберкулина. После убоя животных проводили патологоанатомические исследования туш, внутренних органов и лимфатических узлов на туберкулез. От животных, у которых не обнаружили характерных изменений, патматериал исследовали бактериологическим методом.
Результаты исследований
В благополучном по туберкулезу хозяйстве при трехразовом введении туберкулина 160 коровам реагирующих животных не выявили ни на одно из трех введений туберкулина.
Исследования в благополучных хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями
В хозяйстве 1 при исследовании 346 голов крупного рогатого скота на первое введение реагировало 0, на второе – три, на третье – 0. Увеличение толщины кожной складки у реагирующих коров не превышало 3–5 мм. Реагирующие на второе введение коровы не реагировали на третье введение туберкулина. В хозяйстве 2 при исследовании 243 коров на первое введение реагировало две особи, на второе – 0, на третье – одна корова. На все три введения туберкулина не реагировала ни одна корова. В хозяйстве 3 при исследовании 165 коров на первое введение реагировало восемь (4,84%), на второе – две особи(1,21%), на третье – одна корова (0,6 %). Из восьми реагировавших на первое введение туберкулина животных только одна реагировала на все три введения туберкулина одновременно. В хозяйстве 4 при исследовании 184 коровы на первое введение реагировало пять (2,71%), на II – три особи (1,63%), на третье – одна корова (0,54%). Из пяти реагировавших на первое введение туберкулина животных на все три введения не реагировала ни одна корова.
Следует отметить, что во всех хозяйствах реакции у коров были незначительными, то есть увеличение толщины кожной складки было в пределах 3–5 мм. Полученные результаты в благополучном хозяйстве показывают что специфичность туберкулиновой пробы не снижается при трехразовом ее применении, при условии выдержки интервала между введениями семь суток и при учете реакции через 72 часа после каждого введения туберкулина. В неблагополучных хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями, на второе и третье введения туберкулина выявляются реагирующие животные в незначительном количестве. Так, при исследовании 988 коров на первое введение реагировало 15 (1,51%), на второе – восемь (0,8%), на третье – 0,3% от общего количества.
Интересным является факт, что в благополучных хозяйствах реагирующие на первое введение туберкулина животные практически не реагируют на второе и третье введения туберкулина. Так, в четырех благополучных хозяйствах из всех 26 реагировавших на туберкулин животных только одна корова реагировала на все три введения туберкулина. Из полученных результатов следует, что реакции у здоровых сенсибилизированных коров, как правило, выпадают на второе и третье введения туберкулина, то есть реакции нестабильные.
Исследования в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах
Работу провели в хозяйствах с различной эпизоотической ситуацией по туберкулезу. Хозяйство 1 – оздоровление проводили методом систематических исследований поголовья двукратной внутрикожной туберкулиновой пробой. При каждом аллергическом исследовании выявляли реагирующих коров, при убое которых туберкулезные изменения обнаруживали у единичных животных. В этом хозяйстве в начале испытания booster effect при диагностике туберкулеза мы провели исследование одного стада из 105 коров различными методами исследования на это заболевание в целях дополнительного выявления больных животных. Так, указанное поголовье мы исследовали двукратной внутрикожной, двукратной глазной и пальпебральной туберкулиновой пробами. Из числа этих коров убито 100 животных, сыворотки крови особей исследовали РНГА. При учете реакций на аллергические пробы выявили реагирующих. На внутрикожную пробу, первое введение – две особи, на второе введение – девять, на двукратную глазную пробу – 0, на пальпебральную пробу – 0. РНГА дала положительные показания в 31 случае.
При патологоанатомическом осмотре 100 убитых коров характерные для туберкулеза изменения обнаружены в шести (6,0%) случаях. Из них на первое внутрикожное введение туберкулина реагировала одна корова, на второе – 0, на глазное и пальпебральное введение – 0, в РНГА реакция была положительной в разведении 1:32 в четырех случаях. Одна корова с характерными для туберкулеза изменениями не реагировала ни на одну из примененных проб.
Полученные результаты исследований показывают, что ни один из примененных методов прижизненной диагностики туберкулеза не выявил всех больных животных. Наибольшее количество положительных показаний и выявление больных туберкулезом коров получены при серологическом исследовании сывороток крови методом РНГА. Тем не менее, специфичность показания РНГА остается на низком уровне. Так, в нашем опыте из 31 коровы, давшей положительные результат по РНГА, туберкулезные изменения обнаружены только в четырех случаях (12,9%).
Установленный факт можно объяснить высокой чувствительностью и низкой специфичностью РНГА. Кроме того, известно, что в оздоравливаемых хозяйствах практические ветеринарные специалисты применяют аллергическую туберкулиновую пробу, то есть выявляют и проводят убой животных с реакциями клеточного иммунитета. Животные с реакциями гуморального иммунитета остаются в стаде. По-видимому, для выявления больных туберкулезом особей целесообразно применение методов, способствующих выявлению животных с реакциями клеточного и гуморального иммунитета. Хотя следует отметить, что при туберкулезе гораздо большее значение имеют реакции клеточного иммунитета.
В хозяйстве 1 изучение диагностической ценности booster effect провели на 393 коровах. При учете реакции реагировало на первое введение две особи (0,5%), на второе – четыре (1,01%). И только на третье введение туберкулина реагировало три коровы (0,76%). Следует указать, что реагировавшие на первое введение особи не реагировали на второе и третье введения туберкулина, а из четырех коров, реагировавших на второе введение, три реагировало и на третье введение туберкулина.
При диагностическом убое всех девяти реагирующих коров туберкулез подтвержден у трех, реагировавших на второе и третье введения туберкулина. Проведенными лабораторными исследованиями патматериала убитых коров туберкулез подтвержден еще у одной особи, то есть болезнь подтверждена у четырех коров (44,%).У реагирующих на первое введение двух животных туберкулез не подтвердили патологоанатомическими и лабораторными исследованиями. При анализе сывороток крови методом РСК от девяти убитых коров получены отрицательные результаты во всех случаях.
В хозяйстве 2 оздоровление проводили методом систематических исследований скота двукратной внутрикожной туберкулиновой пробой. При каждом аллергическом исследовании выявляли реагирующих на туберкулин коров, туберкулезные изменения не находили. Нами исследовано стадо в 340 коров. При учете реакции выявили всего50 (14,7%) реагирующих животных. Из них на первое введение туберкулина реагировало 39 (11,4%), на второе – шесть (1,76%), а на третье введение туберкулина реагировало пять коров (1,47%). Из 39 реагировавших на первое введение туберкулина коров реакции на второе введение сохранили 23, на третье – 16. То есть, на все три введения туберкулина реагировало 16 коров (41,02%). Из шести реагировавших на второе введение коров четыре реагировали и на третье введение туберкулина. При диагностическом убое 22 коров (12 реагировало на первое введение: из них 11 реагировало на второе, девять – на третье, то есть, на все три введения туберкулина реагировало девять коров) характерные для туберкулеза изменения не обнаружили ни в одном случае (корова реагировала на все три введения туберкулина).
При лабораторном исследовании материала от 22 убитых животных (биопроба) туберкулез подтвержден в шести случаях (три из них – реагировавшие на все три введения туберкулина, еще три – реагировавшие на второе и третье введения туберкулина). От убитых морских свинок выделена культура M. bovis.
Хозяйство 3 – оздоровление проводили методом систематических аллергических исследований двукратной внутрикожной туберкулиновой пробой с использованием ППД–туберкулина для млекопитающих.
При аллергических исследованиях в хозяйстве выявляли реагирующих на туберкулин животных, однако туберкулезные изменения у реагирующих коров не находили. Нами исследовано стадо в 531 корову, выявлено 52 реагуирующие. Из них на первое введение туберкулина реагировала 31 (5,83 %), на второе – 12 (2,25 %). Только на третье введение туберкулина реагировало девять коров (1,69%). Из 31 реагировавшей на первое введение коровы на второе введение реагировали 12, на третье – семь коров. То есть, на все три введения туберкулина реагировало семь животных (22,58%). Из 12 коров, реагировавших на второе введение, пять реагировало на третье введение туберкулина. При диагностическом убое 20 коров, реагировавших только на второе и третье введения туберкулина, установлено, что 10 реагировало на второе и третье введения, 10 – только на третье введение туберкулина. Характерные для туберкулеза изменения не обнаружили ни в одном случае. При серологическом исследовании сывороток крови 20 убитых коров методом ИФА положительные показания получены в семи случаях.
При лабораторном исследовании патматериала от 20 убитых коров туберкулез подтвержден в двух случаях (первый – у коровы, реагирующей на второе и третье введения туберкулина, второй – у реагирующей только на третье введение туберкулина и давшей положительные показания по ИФА). Кроме того, из материала пяти убитых коров выделены атипичные микобактерии III и IV группы по Раньену.
Хозяйство 4 – оздоровление проводили методом систематических аллергических исследований двукратной внутрикожной туберкулиновой пробой. При каждом исследовании в хозяйстве выявляли реагирующих на туберкулин коров, при убое которых лишь у немногих животных обнаруживали характерные для туберкулеза изменения. Нами исследовано стадо в 754 коров, выявлено 98 реагирующих. Из них на первое введение туберкулина реагировало 74 (9,81%), на второе – 18 (2,38%), только на третье введение реагировало шесть коров (0,79%). Из реагировавших на первое введение туберкулина коров на второе введение реагировали 48, на третье введение – 46, то есть, на все три введения туберкулина реагировало 46 коров (62,16%). При диагностическом убое 20 коров, реагировавших только на второе и третье введения туберкулина, установлено, что 11 реагировало на второе и третье введения, девять – только на третье введение. Характерные для туберкулеза изменения обнаружили в двух случаях (первый – у реагировавшей на второе и третье введения, второй – у реагировавшей только на третье введение туберкулина).
При серологическом исследовании сывороток крови 20 убитых коров методом ИФА положительные показания получены в двух случаях. При лабораторном исследовании патматериала от 20 убитых коров туберкулез подтвержден еще у шести коров. Пять реагировало на второе и третье введения туберкулина, в том числе одна корова с положительными показаниями по ИФА, а еще одна – только на третье введение туберкулина. Кроме того, из патматериала пяти убитых коров выделены атипичные микобактерии III и IV группы по Раньену. Проведенная работа и результаты полученных исследований показывают, что при трехразовом введении туберкулина динамика проявления аллергических реакций у крупного рогатого скота в благополучных хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями, отличается от динамики проявления аллергических реакций в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах.
В благополучных хозяйствах у реагирующих на туберкулин коров реакции нестабильные. У реагировавших на первое введение туберкулина коров большей частью реакции выпадают на второе и третье введения туберкулина. Так, в нашем опыте из 26 реагировавших коров только одна (3,7%) корова реагировала на все три раза введения туберкулина. В неблагополучных по туберкулезу хозяйствах реакции на трехразовое введение туберкулина более стабильные. Так, в четырех хозяйствах среди всех 209 реагировавших коров 69 (33%) реагировали на все три введения туберкулина.
ВЫВОДЫ
В благополучных по туберкулезу хозяйствах здоровые животные не реагируют на трехразовое введение туберкулина при условии введения туберкулина с интервалом в семь суток и при учете реакции через 72 чача после каждого введения.
При применении booster effect в благополучных хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями, специфичность туберкулиновой пробы не снижается.
Применение booster effect в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах довыявляет больных животных.
ЛИТЕРАТУРА
1. Кассич Ю.Я., Целлариус И.К., Тесля А.Е., Кочмарский В.А., Тихонов П.М., Харченко А.М. Рецидивы туберкулеза // Ветеринария, 1981, №4, с. 38-39.
2. Кузин А.И. Оздоровление животноводческих хозяйств от туберкулеза // Россельхозиздат, Москва, 1987, с. 133.
3. Найманов А.Х., Нуратинов Р.А., Дубовой И.С. Применение диагностических тестов в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах // Ветеринария, 1990, №2, с. 30-32.
4. Найманов А.Х. Аллергическая диагностика микобактериальных инфекций крупного рогатого скота // Автореф. дисс. доктора вет. наук, Москва, 1993, 30 с.
5. Найманов А.Х. Сравнительное изучение ППД туберкулина для млекопитающих и БЦЖ теста для аллергической диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота // Бюлл. ВИЭВ, 1987, №64, с. 19-23.
6. Нуратинов Р.А. Выявление больного туберкулезом крупного рогатого скота в состоянии аллергии к туберкулину // Дисс. канд. вет. наук, Москва, 1987, 165 с.
7. Новак Д.Д. Туберкулез сельскохозяйственных животных // Алма-Ата, 1977, 141с.
8. Овдиенко Н.П., Щуревский В.Е., Найманов А.Х., Якушева О.В., Шаров А.М., Плотников Э.С. О кратности введения туберкулина крупному рогатому скоту // Ветеринария, 1987, №8, с. 29-33.
9. Урбан В.П., Широбокова М.М., Данко Ю.Ю. Эпизоотическая вспышка туберкулеза крупного рогатого скота // Сб. научных трудов Ленинградского вет. института, 1981, №68, с. 131-135.
10. Burslin S.J., Muspratt J.A., Rossing Th.H., Studies of the dynamics of reactivity to tuberculin and Candida antigen in institute analyzed patients. – Amer. Rev. resp. Dis. 1986. 134. S. 1072-1074.
11. Cauthen G.M., Snider D.E. Delayed tuberculin boosting in the older population. — Amer. Rev. resp. Dis. 1986. 134. S. 854-858.
